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martes, 2 de febrero de 2010

BACTERIAS ANAEROBIAS


Maria Amparo Bravo

Es importante recordar que tanto en las células eucarióticas
(protozoarios, hongos y algas) como en las procarióticas (bacterias, y algas
verde-azules) se llevan a cabo reacciones químicas que incluyen biosíntesis y
transformación de macromoléculas que constituyen gran parte de la masa
celular a partir de compuestos más simples presentes en el entorno
extracelular. Para estos procesos metabólicos se requiere un aporte de
energía, la cual se encuentra en el compuesto altamente reactivo llamado
adenosin-trifosfato, ATP.
El ATP es generado por dos mecanismos bioquímicos:
1.- Fosforilación a nivel del substrato. Uno de los mecanismos más
sencillos generadores de ATP es la fermentación; en este proceso metabólico
compuestos orgánicos sirven tanto de donadores de electrones (oxidándose)
como de receptores (reduciéndose). Los compuestos que realizan éstas dos
funciones son usualmente metabolitos derivados de un único substrato
fermentable tal como un azúcar. Los carbohidratos son los principales
substratos de la fermentación. Entre las bacterias pueden ser fermentados
también otros compuestos como ácidos orgánicos, aminoácidos, purinas y
pirimidinas.
La fosforilación a nivel de substrato es el único modo de síntesis de ATP
a partir del proceso de fermentación.
Pasteur, fue el primero en reconocer el papel fisiológico de la
fermentación, la llamo “ la consecuencia de la vida sin aire”, muchos de los
organismos que generan ATP por fermentación son anaerobios estrictos,
otros son anaerobios facultativos, siendo capaces de desarrollarse tanto en
presencia como en ausencia de aire, generalmente cambian el modo de
generar ATP al quedar expuestos al aire, la presencia de oxígeno molecular
induce un desplazamiento metabólico de la fermentación a la respiración. Las
anaerobias aerotolerantes presentan la excepción a la regla, la presencia de
oxígeno no modifica su metabolismo generador de ATP. La fermentación
continúa aún en presencia de aire.
2.- Transporte de electrones: realizado en la respiración; proceso
metabólico generador de ATP en el que compuestos orgánicos e inorgánicos
sirven como donadores de electrones (oxidándose) y como últimos aceptores
actúan compuestos inorgánicos (reduciéndose). Usualmente el último aceptor
de electrones es el oxígeno molecular.
CLASIFICACION
1.- Teniendo en cuenta la tolerancia al oxigeno las bacterias anaerobias se
clasifican en:
Anaerobias estrictas: Crecen en atmósferas con una tensión de oxígeno
inferior a 0.5%.
Anaerobias aerotolerantes: Toleran el oxígeno hasta un 8% pero son
incapaces de utilizarlo para su metabolismo.
La tolerancia al oxígeno de éstas bacterias está dada por la presencia de
enzimas superoxido dismutasa (SOD), catalasa y peroxidasa que
catalizan la conversión de radicales superoxido a peróxido de hidrógeno
menos tóxico y a oxígeno molecular.
Anaerobios Facultativos: No necesitan oxígeno para su desarrollo normal,
pero si está presente lo pueden utilizar metabolicamente, es decir que crecen
bajo condiciones tanto aeróbicas como anaeróbicas utilizando el oxígeno como
aceptor final de electrones.
Microaerofilicas: Crecen en presencia de tensiones de oxigeno mínimas y lo
metabolizan utilizándolo como aceptor final de electrones. Necesitan atmósfera
de CO2.
2.- Teniendo en cuenta la morfología y Tincion de Gram:
Se clasifican en cocos, bacilos, Cocobacilos y fusobacterias. Gram positivas y
Gram negativas.
3.- La presencia o no de esporas los clasifica en esporulados y no esporulados.
FUENTES DE INFECCION
Las Bacterias anaerobias están ampliamente distribuidas en la naturaleza.
Podemos diferenciar dos clases de fuentes:
* FUENTES EXOGENAS:
- El suelo.
- El agua: Lagos, sedimento de ríos, océanos, aguas cloacales.
- Alimentos.
- Tracto gastrointestinal de animales.
* FUENTES ENDOGENAS: Cuando se encuentran en el ser humano formando
parte de la flora normal en piel y mucosas. En algunos lugares superan a los
aerobios en una proporción de 1:1000. Las fuentes más importantes son:
o CAVIDAD ORAL
En la boca existe una flora polimicrobiana muy compleja ligada a la variabilidad
de las condiciones existentes en el interior de la misma como son:
1.-El potencial redox (Eh) en los diferentes espacios como pliegues bucales,
superficie de la lengua, surcos gingivales, espacios periodontales.
2.- Presencia de cálculo y placa bacteriana: Entre más antigua es la placa
mejores son las condiciones de anaerobiosis.
3.- Edad: A los pocos días del nacimiento hay temprana implantación de
Lactobacilos y Streptococcus, posteriormente Staphylococcus y Veillonelas. A
los 6 meses de edad encontramos Actinomyces, Nocardias, Fusobacterias.
Podemos mencionar como anaerobios componentes de la flora normal de
cavidad oral y Tracto Respiratorio Superior los siguientes géneros:
o TRACTO RESPIRATORIO SUPERIOR
NASOFARINGE: Son géneros encontrados con mayor frecuencia:
Peptostreptococcus
Veillonella
Propionibacterium
Clostridium
Actinomyces
Eubacterium
Prevotella
Bacteroides
Fusobacterium

o OJOS: A nivel de conjuntiva y conductos lacrimales existen factores de
Protección que realizan el control de la flora como son las lágrimas y la
lisozima. Los géneros de anaerobios encontrados con mayor frecuencia son:
Propionibacterium
Clostridium

o TRACTO GENITO URINARIO
URETRA: La uretra solo está colonizada por microorganismos en la parte más
próxima al peiné.La flora normal es parte de la flora que coloniza la piel que la
recubre. Bacteroides frágilis, Propionibacterium s.p, Peptostreptococcus,
Peptococcus, Lactobacillus, Clostridium, Prevotella, Fusobacterium, Veillonella.
VAGINA: La flora vaginal tiene variaciones de acuerdo a la edad, al nacer
predominan los lactobacilos aerobios. Posteriormente el pH se torna neutro por
lo cual la flora predominante es mixta (cocos y bacilos) hasta la pubertad,
época en la cual el pH se torna nuevamente ácido y hay protección,
predominan los lactobacilos aerobios y anaerobios. El moco cervical también
es un factor de protección porque contiene la lisozima. En el periodo de la
menopausia cambia el pH y predomina nuevamente una flora mixta.
La flora normal vaginal incluye: Bacteroides frágilis, Propionibacterium s.p,
Peptostreptococcus, Peptococcus, Lactobacillus, Clostridium, Prevotella,
Fusobacterium, Veillonella.
o PIEL: A nivel de piel el pH ácido, los ácidos grasos de las secreciones
Sebáceas y la presencia de lisozima son factores de protección.Los géneros
de anaerobios que se encuentran con mayor frecuencia Son:
Clostridium, Propionibacterium, Peptostreptococcus.
o TRACTO GASTROINTESTINAL
Existen factores que influyen en el tipo de flora a nivel del tracto gastrointestinal
Estos son: La flora normal de oro faringe y boca y la presencia de alimentos.
Por lo anterior encontramos una flora residente y una flora transitoria.
La concentración bacteriana varía de acuerdo a las condiciones de pH y a las
funciones de cada una de las partes que conforman el tracto.
Entre más avanzamos en el trayecto del TGI mayor concentración de bacterias
encontramos.Asi a nivel gástrico después de comida podemos encontrar
concentraciones de 10 2 -10 3 bac/ml. Es una flora pasajera pues el pH ácido
no permite sino la permanencia de algunos microorganismos que toleran el
medio.
A nivel de duodeno y yeyuno las concentraciones son de 10 3 -10 4 bac/ml.
A nivel de Ileon 10 7 bac/gr.
A nivel de Ciego 10 9 bac/gr.
A nivel de heces 10 11 bac/gr.
La flora normal intestinal cumple funciones benéficas como:
* Producción de vitamina K
* Transformación de pigmentos biliares en ac. Biliares.
* Contribuyen en la absorción y metabolismo primario de numerosos nutrientes.
* Antagonismo para microorganismos patógenos.
INTESTINO DELGADO: Son géneros de anaerobios encontrados con mayor
frecuencia en duodeno y yeyuno: Peptostreptococcus. Peptococcus,
Lactobacillus.
INTESTINO GRUESO: ileon – colon: Bacteroides frágilis, Prevotella,
Fusobacterium, Peptostreptococcus, Peptococcus, Lactobacillus.
FACTORES DE VIRULENCIA DE BACTERIAS ANAEROBIAS
CAPSULA: Compuesta de polisacáridos. Posee características heterogéneas
según las diferentes especies a modo de glicocálix en unas especies, a manera
de capa gruesa en otras (cápsula).
Inhibe la acción bactericida mediada por el complemento por lo cual los
microorganismos resisten la opzonización y la fagocitosis.
Tiene propiedades de quimiotactismo lo que explica la capacidad del
microorganismo de formar abscesos.
Favorece la adherencia.
PRODUCCION DE ENZIMAS: Estas modifican el ambiente local favoreciendo
la proliferación del microorganismo y la destrucción tisular.Ej: Heparinasa,
colagenasa, hialuronidasa, fibrinolisina, neuraminidasa, Dnasa.
CAPACIDAD DE ADHERENCIA: Mecanismo por el cual se adhieren al epitelio
por diferentes mecanismos e inician su proceso de patogenicidad.
PRODUCCION DE ACIDO SUCCINICO: Mecanismo se favorece la
destrucción celular.
FIMBRIAS: Las fimbrias son estructuras que forman parte del soma bacteriano.
En las especies que las poseen está relacionada con la adherencia
inespecífica de bacterias Gram negativas a las superficies de la mucosa.
Su composición es de naturaleza proteica. Su tamaño varía en cada especie.
En Bacteroides frágilis se han demostrado fimbrias largas compuestas por
fimbrilina. En Porphyromonas gingivalis son mas cortas y finas.
PROTEINAS DE PARED: Proteínas que realizan funciones de adherencia
celular, facilitan el reconocimiento de superficies, actúan como capa protectora.
Se han observado porinas, proteinas S, proteína L (en Peptostreptococcus) y
poseen la propiedad de unirse inespecíficamente a Igs facilitando la invasión de
mucosas. También se han observado proteínas en Bacteroides, Prevotella,
Eubacterium.
LIPOPOLISACARIDO: El lipopolisacárido (LPS) de bacterias anaerobias Gram
negativas posee menos actividad endotóxica que el de las Enterobacterias.El
LPS Tiene relación con la inducción de fiebre, estimula a las células B
policlonales e inducen la producción de citoquinas por los macrófagos.El LPS
del Fusobacterium y Bacteroides mueven el complemento por la vía clásica y
más aún por la vía alterna, generando C5c que actúa como quimiotáctico para
PMN.
SINERGISMO: Los microorganismos anaerobios pueden actuar como
patógenos directos o sinérgicamente con la flora aerobia para dar lugar al
proceso infeccioso. Las bacterias aerobias asociadas consumen oxígeno y
producen gas contribuyendo a descender el Eh; preparando el medio para el
desarrollo de los anaerobios. Por otra parte las bacterias aerobias producen
metabolitos como Vit K requerida por algunos anaerobios.
PRODUCCION DE BETALACTAMASAS: Factor indirecto de patogenicidad,
provocando la inactivación de betalactámicos. La asociación de comensales
productores de betalatamasas en el área de infección permite que los
patógenos sensibles a los betalactámicos queden cubiertos por estos
antimicrobianos dificultando el éxito de la terapia.
FACTORES PREDISPONENTES DE INFECCION POR
ANAEROBIOS
Factores dependientes del huésped, influyen directamente sobre la formación
del proceso infeccioso por el cual un microorganismo incluso comensal puede
invadir tejidos y ser responsable de la infección. Pueden ser:
- Alteraciones del sistema del complemento.
- Alteraciones en la acción de los macrófagos.
- Alteraciones en la integridad de las barreras mucosas
- En edades extremas se presentan alteraciones de la deglución y alteraciones
en el sistema inmune.
- Desnutrición
- Alcoholismo
- Traumas
- Mordeduras
- Inmunosupresión.
- Tromboflebitis
- Arteriosclerosis
- Terapia antimicrobiana
- Diabetes
FISIOPATOLOGIA DE INFECCION POR ANAEROBIOS
Las infecciones causadas por bacterias anaerobias son generalmente
polimicrobianas (Anaerobios, anaerobios facultativos, aerobios)
Las superficies intactas del cuerpo impiden que los anaerobios comensales
penetren a tejidos sanos en número significativo.Cuando esto ocurre las
condiciones normales y el alto potencial Eh inhiben la multiplicación.
Cuando la integridad de piel y mucosas se pierde, los tejidos se lesionan o hay
necrosis que reduce el potencial Eh, los anaerobios encuentran las condiciones
propicias para proliferar e iniciar un proceso infeccioso.
La infección se produce cuando los anaerobios y otras bacterias de la flora
normal contaminan sitios del organismo normalmente estériles.Exepto cuando
se adquieren de fuentes exógenas como por ejemplo infecciones por
Clostridium tetani, botulinum entre otros.
Las manifestaciones clínicas y los síndromes dependen del órgano afectado y
de las condiciones particulares de cada paciente.
SIGNOS CLINICOS CARACTERISTICOS
- Exudado maloliente característico. (Se produce por productos del
metabolismo anaerobio de los ac. Grasos de cadena corta)
- Localización de la infección en lugares próximos a mucosas.
- Necrosis tisular.
- Abscesos.
- Gas en tejidos. (Co, H2)
- Infecciones pos mordeduras.
- Existencia de tromboflebitis séptica.
- Gránulos de azufre en la secreción (Actinomicosis)
- Heridas penetrantes en abdomen y pelvis.
- Infecciones posteriores a cirugía de TGI o TGU.
- Abortos sépticos.
- Cuadros típicos como Gangrena Gaseosa.
SINDROMES CLINICOS
1.-SISTEMA NERVIOSO CENTRAL
MENINGITIS POR BACTERIAS ANAEROBIAS
No es frecuente. En caso de que se presente los hallazgos en el LCR son los
característicos de cualquier otra meningitis bacteriana. Turbidez, pleocitosis
con predominio de PMN o de mononucleares, aumento de proteínas y glucosa
baja.
MICROORGANISMOS MAS FRECUENTES: Cocos Gram positivos
anaerobios, Bacteroides sp, Fusobacterium sp, Clostridium sp, Actinomyces sp,
Propionibacterium sp.
ABSCESO CEREBRAL
Con frecuencia es polimicrobiano pudiéndose encontrar una o más especies.
MICROORGANISMOS MAS FRECUENTES: Peptostreptococcussp,
Bacteroides sp, Actinomyces, Veillonella sp, Fusobacterium sp.
EMPIEMA SUBDURAL
Colección de pus localizada en el espacio potencial entre aracnoides y
duramadre.
MICROORGANISMOS MAS FRECUENTES. Streptococcus anaerobio,
Bacteroides, Fusobacterias, Actinomyces.
ABSCESO EPIDURAL
Entre duramadre, periostio y ligamentos que conforman el canal espinal.Este
espacio virtual es entre vértebras dorsales, lumbares y sacras.
Se puede infectar por: vía hematógena, a partir de osteomielitis vertebral,
implantación de catéteres, cirugías, herida penetrante, ulceras de decúbito,
absceso paraespinal.
MICROORGANISMOS MAS FRECUENTES: Streptococcus anaerobios,
actinomices israelíi (ocasionalmente), Bacilos Gram negativos anaerobios

2.- INFECCIONES PERIODONTALES
Las más frecuentes son la gingivitis y periodontitis según se localicen en
encía o invadan estructuras más profundas del sistema periodontal.
Factores predisponentes: Placa dental y mala higiene oral.
A partir de la formación de la placa del diente que diseca la unión virtual de
encías a superficie dentaria se produce una bolsa con condiciones de bajo
potencial redox, facilitando el crecimiento de anaerobios, provocando formación
de abscesos y diseminación bacteriana.
MICROORGANISMOS MAS FRECUENTES: Peptostreptococcus sp,
,Actinomyces sp,Lactobacillussp,Eubacterium sp,Actinobacillus
actinomycetencomitans,Eikenella corrodens,Capnocitophaga,
Veillonellasp,Bacteroides sp,Fusobacterium sp.
En embarazo aumentan los niveles hormonales por lo cual hay exacerbación
de algunas especies como Bacteroides pigmentados, Aumentando la incidencia
de infecciones gingivales, aumentando las caries y afección de piezas
dentarias.
ABSCESO PERIODONTAL
Infección mixta, en su mayor porcentaje por Bacilos Gram negativos
anaerobios como: Porphyromonas, Fusobacterias, Prevotella. Como Gram
positivos tenemos Peptococcus, Peptostreptococcus, Capnocytophaga.
3.-TRACTO RESPIRATORIO
Los microorganismos anaerobios que forman parte de la flora orofaringea
normal en determinadas situaciones pueden invadir el aparato respiratorio y
producir neumonía, con posible necrosis del parenquima pulmonar (absceso) y
extensión a la pleura (empiema)
La mayoría de infecciones por anaerobios son consecuencia de la aspiración
de secreciones orofaringeas.En condiciones normales el reflejo de cierre de la
glotis, los mecanismos de aclaramiento de las vías respiratorias (tos y
transporte muco ciliar) y el alto potencial de oxido reducción de los tejidos
evitan la invasión del parenquima pulmonar y la infección posterior por
microorganismos anaerobios de la flora orofaringea. Cuando el volumen del
aspirado es muy grande, la densidad de gérmenes muy alta o el potencial de
Eh en tejidos disminuye por debajo de 100mV, este proceso se ve alterado
pudiéndose presentar ABSCESOS PULMONARES, NEUMONIA
NECROTIZANTE, EMPIEMA entre otros.
MICROORGANISMOS MAS FRECUENTES: Prevotella sp, Fusobacterium sp,
Peptostreptococcus sp,
Con menor frecuencia se pueden encontrar
microorganismos anaerobios de la flora oro faríngea.
4.-INFECCIONES INTRA-ABDOMINALES
Pueden presentarse como complicación en enfermedades de tratamiento
médico inicial (Peritonitis primaria bacteriana, pancreatitis aguda.)
En procesos quirúrgicos que evolucionan hacia una peritonitis (apendicitis
aguda, perforación de un ulcus peptico) o como complicación postoperatoria
tras cirugía abdominal.
El contacto de bacterias con el peritoneo, produce una reacción inflamatoria
inmediata con un componente local y uno sistémico.
A nivel local se produce una reacción vascular con un aumento en la capacidad
de absorción peritoneal y aumento de la permeabilidad vascular, esto conlleva
a la salida del torrente vascular de proteínas (reactantes de fase aguda),
fibrinógeno que comienza a formar mallas pretendiendo limitar el proceso
mediante la formación de adherencias. Por otra parte se produce marginación
de elementos formes, especialmente neutrofilos que comienzan a fagocitar
bacterias y células cebadas que producen histamina y aumentan la
permeabilidad vascular.
Cuando se limita el proceso por ésta reacción se producirá una peritonitis
localizada o absceso intra -abdominal, si no se produce ésta limitación se
genera la peritonitis difusa.
Una característica propia de infecciones intra-abdominales es la de ser
difásicas. En primera instancia predominan las bacterias aerobias que una vez
se ha disminuido la tensión de oxígeno se lleva a cabo la proliferación de la
flora anaerobia.
INFECCION DE VIAS BILIARES
La alteración de vías biliares conlleva a la disfunción de la ampolla de water y
a cambios fisiológicos en el duodeno y en el peristaltismo intestinal, esto
produce una modificación ecológica del intestino aumentando la flora anaerobia
en tractos altos. Se colonizan las vías biliares por anaerobios que actúan en el
epitelio lesionado químicamente y se produce la infección biliar.
5.- INFECCIONES GINECOLOGICAS
VAGINOSIS BACTERIANA
Trastorno polimicrobiano producido por el cambio del pH ácido de la vagina y
de la concentración de Lacto bacilos lo cual hace que se eleve la concentración
de otros microorganismos especialmente anaerobios

MICROORGANISMOS MAS FRECUENTES: Gardnerella vaginalis, Mobiluncus
Bacteroides, Peptostreptococcus.
ENDOMETRITIS POSTPARTO
Existen dos factores importantes en la patogenia de éstas infecciones:
- Es necesario que los microorganismos patógenos alcancen una
concentración crítica.
- La diseminación de las bacterias en la cavidad abdominal aumenta el riesgo
de infección.
Durante el parto, el líquido amniótico se contamina con bacterias después de la
ruptura de membranas, las cuales representan la fuente más común de
infección postparto.El líquido contiene sustancias que tienen poder
antibacteriano por lo tanto tienen que haber condiciones que favorecen la
infección como son: Parto prolongado, cesárea, ruptura prematura de
membranas, elevado número de exámenes pélvicos, presencia de anemia.
MICROORGANISMOS ANAEROBIOS MAS FRECUENTES: Es una entidad
polimicrobiana se encuentran bacterias aerobias y anaerobios como:
Bacteroides sp, Fusobacterium sp, Peptococcus sp, Peptostreptococcus sp.
SEPSIS POSTABORTO
Los servicios de personal no médico para interrumpir la gestación, las
condiciones de higiene en que se realizan las maniobras, la presencia de
productos de concepción retenidos, la existencia de cualquier traumatismo
uterino y la vaginosis bacteriana previa son factores condicionantes en la
patología del aborto séptico
MICROORGANISMOS IMPLICADOS: Los anaerobios presentes en vagina y
cervix.
ENFERMEDAD PELVICA INFLAMATORIA
Infección de la parte superior del tracto genital: Endometrio (endometritis),
trompas (salpingitis), ovario (ooforitis), pared uterina (miometritis) o porciones
del peritoneo parietal (peritonitis).
Factores de riesgo: ETS, presencia de DIU, Irrigaciones vaginales.
MICROORGANISMOS ANAEROBIOS MAS FRECUENTES: Bacteroides sp,
Peptostreptococcus sp,
6.- PIEL Y TEJIDOS BLANDOS Y OSTEOARTICULARES
ULCERAS CUTÁNEAS
La infección suele ser mixta, microorganismos procedentes de flora fecal y
urinaria. Los anaerobios más frecuentes: Bacteroides sp, Porphyromonas sp,
peptococcus sp, y Peptostreptococcus sp.
ABSCESOS
La presencia de bacterias provoca atracción de PMN y macrófagos. Una vez
se destruyen las células por los microorganismos se liberan enzimas.Las
bacterias se multiplican y pasan de fase logarítmica a estacionaria, consumen
el oxígeno creando un ambiente anaerobio que impide la acción normal de
PMN.
Los PMN parasitados viran su ambiente a ph ácido que al romperse cambian el
ph del exudado.
Algunos antimicrobianos actúan con dificultad a ph ácido. La acción de los
betalactámicos en fase estacionaria es escasa.
El antibiótico no resuelve el absceso y debe drenarse quirúrgicamente.
MICROORGANISMOS MAS FRECUENTES: Peptostreptococcus sp
Bacteroides sp, Prevotella sp.
PIE DIABETICO
Los problemas vasculares y nerviosos junto a alteraciones defensivas e
higiénicas conducen al desarrollo de úlceras infectadas.
MICROORGANISMOS ANAEROBIOS MAS FRECUENTES:
Peptostreptococcus sp, Bacteroides sp, Clostridium sp.
MIONECROSIS
Infección muy grave, con alto índice de mortalidad.
Se caracteriza por aparición súbito de dolor en una herida previa, edema
frialdad, palidez con áreas de color bronce, bullas hemorrágicas, necrosis y un
cuadro de toxemia.
MICROORGANISMOS MAS FRECUENTES: Clostridium perfringens, C. novi,
C. sépticum, C. histolíticum.
CELULITIS ANAEROBIA
Se localiza en tejidos epifasciales, puede evolucionar con grandes necrosis.
Las manifestaciones sistémicas son raras. Se puede presentar dolor, edema,
eritema, hipersensibilidad y crepitación, supuración maloliente.
Anaerobios más frecuentes: Clostridium sp, Peptostreptococcus, Bacteroides
sp, Prevotella sp.
DIAGNOSTICO MICROBIOLOGICO DE INFECCION POR
ANAEROBIOS
El diagnóstico microbiológico de infecciones por anaeróbios se realiza
mediante cultivos en anaerobiosis, los cuales nos permiten recuperar
el microorganismo y confirmar el diagnóstico clínico de la infección.
MUESTRAS ADECUADAS PARA EL PROCESAMIENTO:
Se consideran muestras inadecuadas las que provienen de las superficies
mucosas ya que es difícil diferenciar si el agente causal aislado es un
comensal o el germen infeccioso.
Muestras de sitios que no albergan flora normal, obtenidas por aspiración son
adecuadas para cultivar en anaerobiosis.
TOMA DE MUESTRAS
Para obtener unos resultados satisfactorios, es indispensable una buena
Selección, y recolección de la muestra. Un transporte rápido, evita que las
bacterias esten expuestas al oxígeno.
Es de particular importancia realizar una perfecta decontaminación de piel con
jabón quirúrgico y solución desinfectante como alcohol o compuestos yodados,
para eliminar la flora normal.
La toma de la muestra debe hacerse con jeringa, los hisopados no se
recomiendan por la exposición del espécimen al aire y porque son más
susceptibles a contaminación con bacterias de la flora normal.
Una vez tomada la muestra debe evitarse la exposición al oxígeno tapando el
extremo de la aguja con un tapón de caucho después de eliminar el aire si éste
ha pasado a la jeringa.
Transportar al laboratorio en el menor tiempo posible, existen factores que
pueden modificar la composición bacteriana inicial tales como temperatura, o
humedad, El tiempo no debe exceder de 20 minutos.
Las muestras no se deben guardar o transportar refrigeradas porque en el frío
el oxígeno se difunde más rápidamente.
En caso de tener acceso a medios de transporte debe realizarse en un medio
específico para bacterias anaerobias y deben tener atmósfera anaerobia.
SISTEMAS DE INCUBACION ANAEROBIA
�� Jarra anaeróbica: Recipiente de cierre hermético, en el que se elimina
el oxígeno por diferentes medios (sobres generadores de gases como
hidrógeno, nitrógeno y CO2 que desplazan el oxígeno y crean un
ambiente anaerobio), incluyen un catalizador y un indicador de
anaerobiosis.
�� Cámara de anaerobiosis: Cabina herméticamente cerrada de plástico,
metal, fibra de vidrio o polivinilo, con un sistema de intercambio, dos
puertas interna y externa y que puede llenarse de gas libre de oxígeno,
lleva además soportes con guantes incorporados para realizar
manipulación de muestras en el interior.
�� Bolsas de anaerobiosis: Bolsas de plástico transparente.Usan también
sobres generadores de gases proporcionales a su tamaño e indicadores
de anaerobiosis.
MEDIOS DE CULTIVO
Se utilizan medios selectivos, no selectivos y de enriquecimiento.Los
medios de cultivo para anaerobios tienen una alta proporción de peptonas
e hidratos de carbono ya que su metabolismo es más exigente que el de
bacterias facultativas y requieren además factores de crecimiento como la
hemina y vitamina K.
Los medios empleados con mayor frecuencia son:
- AGAR SANGRE ANAEROBIO (ASA): Agar sangre complementado con
Vitamina K y hemina Medio no
selectivo. Crecen anaerobios y anaerobios facultativos.
- AGAR SANGRE LACADA KANAMICINA VANCOMICINA (ASLKV):
Medio selectivo para bacilos Gram negativos anaerobios, favorece
producción de pigmento.
- FENILETIL ALCOHOL AGAR (FEA): Inhibe el crecimiento de bacilos
Gram negativos aerobios facultativos.Crecen la mayor parte de anaerobios
Gram positivos y Gram negativos, el alcohol sirve como aceptor final de
electrones.
AGAR BACTEROIDES BILIS ESCULINA (BBE): Selectivo para
Bacteroides sobre todo grupo frágilis, pueden crecer también fusobacterium.
- AGAR YEMA DE HUEVO (EYA): Para Clostridium sp.
- AGAR CICLOSERINA CEFOXITINA FRUCTOSA (CCFA): Para
Clostridium difficile.
- AGAR CHOCOLATE: Contiene hemina.
- CALDO TIOGLICOLATO
- CALDO GLUCOSA CON CARNE: Suplementado con vit k y hemina
- CALDO INFUSION CEREBRO CORAZON
INCUBACION
La mayoría de los casos se incuban a una temperatura de 35 a 37 ºC.
El tiempo de incubación debe ser de 72 a 96 horas ya que estos
microorganismos a diferencia de los aerobios son de crecimiento lento.
Se debe evitar la exposición al aire.
IDENTIFICACION DE BACTERIAS ANAEROBIAS
Una vez ingresa la muestra al laboratorio, se procede a confirmar datos de
identificación como: Nombre y apellidos del paciente, Nº de historia clínica,
Fecha y hora de toma de la muestra, servicio donde está hospitalizado, Nº de
cama.
TINCION DE GRAM : Se deben observar características morfológicas y de
Tinción que son sugestivos de las bacterias anaerobias:
Bacilos Gram negativos decolorados o mal teñidos.
Es importante observar la forma, el tamaño y la disposición de las bacterias,
número relativo de microorganismos presentes, presencia de esporos, rasgos
morfológicos como ramificación.filamentos, cuerpos esféricos, extremos en
punta y formas granulares.
La presencia y cantidad de leucocitos PMN (reacción leucocitaria) y de células
epiteliales.
INOCULACIÓN EN MEDIOS DE CULTIVO: Antes de realizar la inoculación se
deben tener en cuenta aspectos
como:
* Tipo de muestra (líquidos, tejidos, secreciones) para aplicar los protocolos
respectivos.
* Sistema anaeróbico que se va a usar: Cuando no se trabaja en cámara
anaeróbica se debe tener agilidad en la realización del procedimiento porque la
presencia del oxígeno del aire ocasiona pérdida de gran número de bacterias.
* Técnica de aislamiento adecuada.
La inoculación inicial se realiza en medios de inoculación primaria. Sólidos y
líquidos.
Se realiza atmósfera anaeróbica y se incuban 35-37 ºC durante 24 a 96 horas.
En éste lapso de tiempo se realiza observación directa diaria, buscando la
presencia de crecimiento bacteriano; colonias en medios sólidos o turbidez y
cambios de color en medios líquidos.
Una vez se presenta crecimiento de colonias se debe observar sus
características como tamaño, color, superficie, consistencia.Se realizan
tinciones de Gram a las colonias aisladas.
PRUEBA DE AEROTOLERANCIA: Se realiza a toda colonia que haya crecido
en ambiente anaeróbico.
Consiste en transferir cada colonia de la placa de aislamiento anaerobio a una
placa de agar sangre aerobio, incubándose de 12 a18 horas con atmósfera de
CO2 del 5 al 10% en aerobiosis.
El crecimiento o no del microorganismo en aerobiosis nos hace la diferencia
entre un anaerobio estricto o un anaerobio facultativo.
FASES DE IDENTIFICACION
Existen diferentes métodos de identificación de bacterias anaerobias.
Se pueden diferenciar tres fases de identificación de bacterias anaerobias, de
acuerdo al nivel de complejidad y a los recursos del laboratorio donde se
realiza.
FASE I: Se relaciona con la morfología y tinción; se realiza mediante la Tinción
de Gram.
FASE II: Identificación de género mediante:
1.- Pruebas de sensibilidad a antimicrobianos: se realizan con discos de papel
de filtro impregnados con antimicrobianos (sensidiscos) como kanamicina,
colistina, vancomicina. La lectura se realiza a las 24-48 horas de incubación
siendo sensible cuando el halo de inhibición es igual o mayor de 10mm de
diámetro.
2.- Pruebas bioquímicas: Una vez se obtiene un cultivo puro del
microorganismo se pueden realizar pruebas bioquímicas de acuerdo al tipo de
microorganismo según sea Gram positivo o Gram negativo. Ejemplo catalasa,
indol, nitratos, urea, lecitinasa, lipasa.
FASE III: Para identificación definitiva de anaerobios la cual incluye genero y
especie. Requiere además de las pruebas utilizadas en el nivel II, una serie de
métodos adicionales. Y pruebas sofisticadas como la cromatografía liquido-gas.
Existen también sistemas enzimáticos rápidos como RapID-ANA II, MicroScan,
o ANI Card (Vitek).Para utilizar éstos sistemas es necesario tener un
aislamiento del microorganismo en cultivo puro.
GENERO CLOSTRIDIUM
Las Bacterias del género Clostridium son bacilos Gram positivos esporulados,
la mayor parte de sus especies son anaerobios estrictos .Su hábitat es el medio
ambiente, el suelo y el tracto gastrointestinal del hombre y animales.Las
esporas los hacen muy resistentes a los factores externos como calor,
humedad, desecación,desinfectantes.
MORFOLOGIA: Pueden observarse como bacilos largos, estrechos,
Pleomorficos a veces de formas filamentosas de gran
longitud.Forman esporas que pueden situarse en la región terminal,
subterminal o central de acuerdo a la especie.
Algunos son móviles poseen flagelos perítricos, otros son capsulados como el
Clostridium perfringens.
METABOLISMO: Carecen de citocromos necesarios para el transporte de
electrones, de catalasas y peroxidasas.
La mayoría producen grandes cantidades de gas (CO2 e H) por fermentación
butírica.Fermentan varios azúcares lo que permite la diferenciación de especies
junto con reacciones bioquímicas como: Liquefacción de la gelatina, reducción
de nitratos, producción de indol a partir de triptófano.
Existen especies proteoliticas y otras sacarolíticas.
FACTORES DE PATOGENICIDAD:
Poseen enzimas como colagenasa
Proteinasas, hialuronidasas, desoxirribonucleasa, lecitinasa y neuraminidasa
las cuales actúan a nivel local produciendo destrucción de tejidos, algunas de
éstas actúan como toxinas en el huésped.
Toxinas: Proteínas que elabora el microorganismo y llegan a ser potentes
exotoxinas que actúan a nivel de órganos y sistemas ,como la toxina tetánica y
botulínica, cuya potencia se halla relacionada con su afinidad por el sistema
nervioso central y sus acciones farmacológicas están relacionadas con el
bloqueo de la liberación de acetilcolina en las terminaciones nerviosas.
Pueden diferenciarse varias clases según el tropismo del microorganismo:
Neurotoxinas, enterotoxinas, hemolisinas, histotoxinas.
Las esporas, Altamente resistentes al calor y a los desinfectantes sobreviven
durante largos periodos de tiempo expuestas al aire, germinan cuando
encuentran las condiciones necesarias de oxido-reducción.
Poseen antígenos flagelares (H) termo lábiles y antígenos somáticos (O)
lipopolisacáridos que son termo estables.
ESPECIES CLINICAMENTE IMPORTANTES
- Clostridium tetani. Produce el tétano
- Clostridium botulinum produce botulismo, botulismo infantil, botulismo de
heridas.
- Clostridium perfringens. Produce intoxicación alimentaria, mionecrosis,
celulitis anaerobica, colitis necrotizante.
- Clostridium difficile. Produce colitis pseudomembranosa.
GENERO BACTEROIDES
Bacilos Gram negativos pequeños de extremos redondeados, poseen largas
vacuolas, contienen esfingolípidos en la membrana .Algunos poseen enzima
súper oxido dismutasa (SOD) y otras proteínas inducidas por el oxígeno.
Anaerobios aerotolerantes, no forman esporas, son inmóviles.
Forman parte de la flora normal del TGI, está común mente en íleon terminal y
prolifera en colon en proporciones de 10 9 microorganismos/gr.También se
puede encontrar en boca, vagina y uretra.
METABOLISMO: Producen un conjunto de ácidos succínico, láctico, acético,
Fórmico y propiónico y algunos de ellos una mezcla de
ac.acético y butírico, como productos de la fermentación de la glucosa.
FACTORES DE PATOGENICIDAD:
- Cápsula compuesta de polisacáridos A y B, la cual puede conferir resistencia
para mecanismos de defensa del huésped.Los antígenos capsulares pueden
causar más una respuesta de células T que una mediada por anticuerpos.
Puede estimular los depósitos de fibrina e inducir la formación de abscesos.
- Degrada el complemento del huésped por factores no identificados.
- Produce enzimas como neuraminidasa, hialuronidasa, Dnasa, fosfatasa y
muy ocasionalmente fibrinolisinas.
- Produce heparinasa que puede predisponer a trombosis vascular.
- Produce Zinc metalo proteasas (Entero toxina).
ESPECIES CLINICAMENTE IMPORTANTES:
Bacteroides frágilis.
Bacteroides melaninogénicus
.
PATOGENIA
Los Bacteroides son microorganismos comensales no invasores, pero en
ciertas circunstancias, pueden producir infecciones graves y mortales se ha
reportado hasta un 60% de mortalidad. Infecta cualquier sitio del organismo.
Producen secreción purulenta y suelen producir gases en el interior de los
tejidos. Los factores predisponentes de mayor frecuencia son los traumas
quirúrgicos o accidentales, edema, anoxia y destrucción de tejidos, en éstas
circunstancias, pueden invadir los tejidos multiplicándose rápidamente.
Con frecuencia pueden producir abscesos.
Beneficios:
- Estos microorganismos producen ac. Acético, butírico y propiónico
Proporcionando el 70% de la energía a los entericitos colonicos.
- Juegan un papel clave en la recirculación de ac. Biliares entero hepáticos y en
la biotransformación de ácidos biliares.
- Compite por los substratos con microorganismos patógenos.
- Produce algo de vit K.
DIAGNOSTICO MICROBIOLÓGICO
* Toma de muestra por aspiración.
* Cultivo para anaerobios.
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